И.В. Садовникова, В.В. Садовникова, Л.Б.Снопова

Государственная медицинская академия; ЦНИЛ, Нижний Новгород

Морфологические аспекты регенерационной терапии при токсическом медикаментозном гепатите

Одним из приоритетных направлений в гепатологии является поиск способов полимодального действия, направленных на нормализацию нарушенных функций адаптационных регуляторных механизмов, обеспечивающих гомеостазирование организма. Несмотря на большой арсенал медикаментозных препаратов, лечение хронических заболеваний печени не всегда эффективно, дает временный положительный эффект, а неблагоприятные последствия в виде осложнений и побочных действий заставляют клиницистов совершенствовать методы патогенетической терапии с привлечением новых лекарственных средств [1—4]. Большой интерес представляет применение биологически активных веществ, способных стимулировать восстановительные процессы, в частности гормонов [5].

В последнее время большое место в комплексном лечении хронических гепатитов отводятся гепатопротекторам нового поколения, в частности препарату галстены в связи с ее многосторонним регулирующим действием на печень и желчевыводящие пути, сочетающему свойства гепатопротектора, спазмолитика, противовоспалительного и желчегонного средства [6, 7]. Однако остается нерешенным вопрос о применении препарата галстены в детской гепатологии, особенно при лечении лекарственных гепатитов, доля которых в последнее время неуклонно растет и приводит к таким тяжелым неблагоприятным последствиям, как острая печеночная недостаточность. В 25% всех случаев ее причиной являются лекарственные гепатиты, а по материалам последних конгрессов «Человек и лекарство», 3% больных погибают от лекарственной болезни. Приведенные данные послужили основанием для дальнейшего изучения действия препарата галстены.

Цель работы — оценка эффективности действия препарата галстены на репаративные процессы в печени при лекарственном гепатите путем биологического моделирования регенерационного механизма обратимости апоптоза гепатоцитов при токсическом воздействии противосудорожного препарата депакина, широко применяемого в настоящее время в детской неврологии.

Материалы и методы. Материалом служила печень 39 белых беспородных крыс. Депакин вводили в дозе 0,2 мл интрагастрально один раз в день в течение 30 дней. Препарат галстену — также через зонд в дозе 0,5 мл два раза в день ежедневно в течение месяца.

Все экспериментальные животные были разделены на следующие группы: I группа — исходный гепатит — животные, получавшие депакин в количестве 0,6 мл; II группа — животные, получавшие галстену; III группа — нелеченые животные (гепатитный контроль), забитые через месяц после прекращения введения депакина для изучения спонтанной обратимости патологических изменений; IV группа — интактный контроль — животные, не подвергавшиеся никаким воздействиям.

Животных умерщвляли декапитацией с соблюдением основных требований к эвтаназии, изложенных в приложении 4 к «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденным Приказом № 755 от 12 августа 1977 г. МЗ СССР «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных» [8, 9]. На гистологических препаратах, окрашенных гематоксилином, эозином и по Ван-Гизону, подсчитывали количество нормальных (НГ) и дистрофически измененных (ДГ) гепатоцитов, куда включали клетки с дегенерирующими ядрами, без ядер и с разрушенной плазмолеммой, двуядерные клетки, число ядрышек. На основании отношения НГ/ДГ вычисляли коэффициент нормализации паренхимы (КНП). С помощью окулярной морфометрической сетки светооптически измеряли средний объем ядер гепатитов. Результаты морфометрических измерений представлены в условных единицах (усл.ед.) на тест-площадь препарата. Электронно-микроскопическое исследование проведено в ЦНИЛ НГМА. Срезы готовили на ультрамикротоме LКВ-3, контрастировали по Рейнолдсу и исследовали в электронном микроскопе ЭМ-125. Цифровой материал обработан методами вариационной статистики с использованием программы Medstat, разработанной в НГМА.

Результаты и обсуждение. Проведенные исследования показали, что в печени крыс, получавших депакин (I группа), наблюдали изменения паренхимы деструктивного характера, проявляющиеся в виде белковой дистрофии разной степени выраженности: у некоторых животных появлялись крупные гиалиноподобные белковые включения — тельца Маллори, являющиеся исходом гиалиновокапельной дистрофии и приводящие клетку к некрозу. Единичные клетки подвергались гидропическому перерождению — баллонные клетки. Этот вид дистрофии рассматривают как выражение колликвационного очагового некроза [10], возникающего при токсическом гепатите за счет нарушений водно-электролитного обмена. На месте погибших клеток видны скопления гистиолимфоцитарных элементов. Воспалительные процессы в строме органа характеризуются появлением клеточных инфильтратов (лимфоидные, плазматические клетки, нейтрофилы) по ходу портальных трактов. В просветах синусоидных капилляров встречаются эозинофилы, клетки Купфера, округлые, с набухшей цитоплазмой. Количество нормальных гепатоцитов уменьшилось с 81,03±0,33 %,как у интактных животных, до 64,59±0,57 % (р<0,05) (см. таблицу).

Морфологические показатели паренхимы печени крыс при токсическом медикаментозном гепатите и стимуляции регенеративных процессов (Х±SХ)

Ультраструктурные изменения в виде просветления матрикса митохондрий, уменьшения числа крист следует рассматривать как следствие интоксикации, приводящей к уменьшению образования АТФ и снижению окислительного фосфорилирования. Дистрофические изменения в цитоплазме представлены фрагментацией мембран, расширением и вакуолизацией цистерн гладкой эндоплазматической сети.

Наряду с дистрофическими изменениями в паренхиме печени происходят незначительные регенераторные процессы, выражающиеся в слабой гипертрофии ядер (средний объем ядер составлял 0,33±0,001 против 0,27±0,002 усл.ед. у интактных животных, р>0,05), увеличении числа ядрышек (33,34±3,33 % ядер содержали по 2—3 ядрышка, что связано с усилением белковосинтетической функции клеток, у интактных — 11,30±1,07 %, р<0,05). Изменения плазмолеммы гепатоцитов в виде гиперплазии микроворсинок на билиарном и васкулярном полюсах подтверждают активность обменных процессов через клеточную поверхность. Перинуклеарное пространство расширено, в кариолемме образуется впячивание в связи с увеличением поверхности ядра, хроматин расположен неравномерно, что свидетельствует о гиперфункции ядра.

Через 30 дней после прекращения введения депакина (III группа животных) обратимость патологических изменений в печени выражена слабо. Местами нарушена балочная структура, расширены синусоиды в центре долек, встречаются очаговая круглоклеточная инфильтрация, преимущественно в области перипортальных полей, очаги некрозов. Среди дистрофически измененных гепатоцитов преобладают клетки с патологией ядра — с разрушенной мембраной, лизисом и пикнозом ядра. В просвете синусоидов — тельца Маллори. Коэффициент нормализации паренхимы остался прежним — 1,84±0,07 по сравнению с исходным — 1,86±0,12. Ядра гепатоцитов несколько гипертрофированы, средний объем гепатоцитов — 0,34±0,03 усл. ед., у интактных — 0,27±0,02, р>0,05. Незначительно возросло число ядер, содержащих несколько ядрышек, их стало 41,73±3,02% (в группе с исходным гепатитом — 33,34±3,33%, р<0,05). Почти в 2 раза возросло количество двуядерных клеток — 14,75±1,76 против 7,9±0,52‰ в исходной группе (р<0,05).

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что введение депакина в лечебных дозах приводит к морфологическим изменениям в печени воспалительного и деструктивного характера, которые медленно подвергаются спонтанной обратимости. Компенсаторные процессы в патологически измененной печени проявляются лишь в виде гипертрофии ядер и гиперплазии ядрышек.

В связи с медленным течением восстановительных процессов при спонтанной обратимости для стимуляции регенерации использовали препарат галстены в дозе 0,5 мл 2 раза в день в течение месяца. У большинства животных с токсическим гепатитом после лечения галстеной наблюдалась тенденция к нормализации структуры печени (см. рисунок).

Нормализация структуры печени на фоне лечения галстеной

Восстановлено балочное строение, незначительно выражена очаговая инфильтрация стромы органа круглоклеточными элементами, преимущественно в зоне погибших гепатоцитов. Встречаются единичные митозы, свидетельствующие об усилении пролиферативных процессов, КНП=3,10±0,04 по сравнению с исходным гепатитом — 1,86±0,12 (р<0,01), выражена гипертрофия ядер; 45% ядер содержат два ядрышка и более, что свидетельствует об интенсивности белкового синтеза. В большом количестве встречаются двуядерные клетки — 17,19±0,39 (у интактных — 20,33±0,34‰, р>0,05).

Заключение. Полученные данные позволяют сделать вывод о выраженном стимулирующем действии препарата галстены на репаративные процессы патологически измененной печени, что дает возможность предложить использование данного препарата для регенерационной терапии при токсических поражениях печени в клинике, в частности в детской гепатологии при токсических медикаментозных гепатитах.

Литература

1. Логинов А.С. Узловые вопросы клинической гепатологии. Тер архив 1990; 62(2): 3—7.
2. Подымова С.Д. Болезни печени. М: Медицина; 1998; 554 с.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т. 2. М: Медицина; 1997.
4. Czaja A.J., Gudwig J., Boggenstoss A.H. et al. The nature and prognosis of severe cryptogenic chronic active hepatitis. Gastroenterology 1993; 104(6): 1755—1762.
5. Солопаева И.М., Солопаев Б.П. Стимуляция регенерации патологически измененной печени и хорионический гонадотропин. Н. Новгород: Изд-во ННГУ, 1991; 124 с.
6. Клиническая эффективность галстены в лечении заболеваний печени и желчного пузыря. Тр. Московской Междунар. гомеопат. конф. М; 1998; 86 с.
7. Zilov V.G. Die Autoregulation als Wirkprinzip der Komplementarmedizin. Zeitschrift der Wiener Internationalen Аcademie fur Ganzheitsmedizin. Gamed 1997; 4: 4—8.
8. Обезболивание животных в эксперименте. М: Наука; 1985; 25 с.
9. Эвтаназия экспериментальных животных (методические рекомендации по выведению животных из эксперимента). М: Наука; 1985; 32 с.
10. Морфологическая диагностика заболевания печени. Под ред. В.В. Серова, К.М.Лапиша. М: Медицина; 1989; 335 с.