Е.И. Яковлева, М.Л. Смирнова

Государственная медицинская академия, Нижний Новгород

Влияние озонированного физиологического раствора на ультраструктуру гепатоцитов

Озонотерапия оказывает положительное влияние на функциональное состояние печени и внутрипеченочную гемодинамику [1]. Предварительное введение малых доз озона предохраняет печень при реперфузионных повреждениях [2]. Как указывает Н.П. Лебкова [3], в клетках печени под влиянием озона стимулируются структурно-функциональные механизмы.

Задачей нашего исследования явилось изучение субклеточной структуры гепатоцитов при однократном введении озонированного физиологического раствора (ОФР). Опыты выполнены на белых нелинейных крысах массой 180 г. Контролем служили интактные животные. Опытным крысам внутрибрюшинно вводился 1 мл ОФР с дозой озона 2,8 мкг/кг. Материал для электронно-микроскопического анализа забирали через 60 мин в 2,5% раствор глютарового альдегида с последующей дофиксацией в четырехокиси осмия. После дегидратации в спиртах ткань заливали в эпоксидные смолы — аралдит и эпон-812. Ультратонкие срезы окрашивались по Рейнольдсу и просматривались на электронном микроскопе ЭМ-100БР.

Результаты анализа показали, что у животных после ОФР в большинстве гепатоцитов отмечалась активация ядерного аппарата: увеличение ядрышка с отчетливо выраженной фибриллярной и гранулярной составляющей(см. рисунок),

а	б
в	г

эктапирование его к кариолемме, в некоторых гепатоцитах было два ядрышка. Выявлена гетерогенность митохондрий с признаками гиперплазии. Большая часть их находилась в ортодоксальном состоянии, со светлым матриксом увеличенного размера, что свидетельствует о их высоком энергетическом потенциале [4]. В некоторых митохондриях наблюдалось просветление матрикса и деструкция крист. В единичных случаях обнаружена их вакуолизация. Отмечалась гиперплазия гранулярного эндоплазматического ретикулума (ГЭР) и значительное содержание гранул гликогена. В единичных наблюдениях обнаружено дилатирование цистерн ГЭР с деструкцией его мембран. В отдельных клетках имело место незначительное диффузное набухание цитоплазмы. В гепатоцитах выявлено много первичных и вторичных лизосом. Наряду с этим имелись единичные вакуоли с фрагментами мембран внутри. В цитоплазме гепатоцитов встречались иногда миелиноподобные фигуры, у отдельных митохондрий отмечалась повышенная осмиофилия наружной мембраны.

Проведенные исследования свидетельствуют о повышении функциональной активности ядерного аппарата гепатоцитов[5, 6] после парентерального введения озона. Мы наблюдали также после введения озона высокую активность белок­синтезирующего аппарата в клетках печени при искусственном кровообращении [7] и в нейронах неокортекса в постреперфузионном периоде [8]. Повышение энергетического потенциала (состояние митохондрий) и накопление гликогена после воздействия озона Н.П. Лебкова [9] связывает с резорбцией и трансформацией липидов в гликоген. Появление миелиноподобных структур связано с активацией перекисного окисления липидов мембран [10]. В основе терапевтического эффекта ОФР лежит окислительный стресс, его терапевтический эффект обусловлен мобилиза­-ци­ей антиоксидантной системы [3,11]. По-видимому, эти субклеточные изменения структуры гепатоцитов являются следствием адаптации к фактору «слабой силы», поскольку, по данным В.А.Шку­рупия [12], при действии стресс-фактора «умеренной силы» происходит снижение функциональной активности ядер и содержания гликогена в цитоплазме гепатоцитов.

Таким образом, электронно-микроскопический анализ ультраструктуры гепатоцитов показал, что однократное введение малой дозы озона (2,8 мкг/кг) вызывает разнонаправленные изменения субклеточной организации клеток паренхимы печени: преобладают адаптивные реакции — гиперплазия митохондрий и ГЭР, увеличение площади и количества ядрышек, лизосом, и, в меньшей степени, — деструктивные процессы — единичные вакуоли и миелиноподобные структуры.

Литература

1. Негода В.В., Свириденко О.Ю., Разваляева О.В., Устинова М.Н. Влияние озонотерапии на перекисное окисление липидов, системную и внутрипеченочную микроциркуляцию при хронических гепатитах и циррозах печени. В кн. :Озон и методы эфферентной терапии в медицине. Тез. док. III Всерос. науч.-практ. конф. Н.Новгород; 2000; с.80—81.
2. Ajamieh H.H., Menendez S., Merino N., Sam S., Leon O.S. Ischemic and ozone oxidative preconditioning in the protection against hepatic ischemic-reperfusion injury // J of the ozone association, London; 2001; 4: 1—14.
3. Лебкова Н.П. Ультраструктурные аспекты озонотерапии. В кн.: Озон и методы эфферентной терапии в медицине. III Всерос. науч.-практ. конф. Тез. докл. Н.Новгород; 1998; с.33.
4. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов. Пер. с чешск. М: Медицина; 1985; 432 с.
5. Збарский И.Б. Организация клеточного ядра. М: Медицина; 1988; 368 с.
6. Блюгер А.Ф., Залцмане В.К., Карташова О.Я. Ультраструктурная патология печени: электронно-микроскопический атлас. Рига: Зинатне; 1989; 319 с.
7. Никольский В.О., Яковлева Е.И., Бояринов Г.А. Электронно-микроскопические исследования печени в восстановительном периоде после 3- часового озонированного искусственного кровообращения. В кн.: Озон и методы эфферентной терапии в медицине. Тез. докл. III Всерос. науч.-практ. конф. Н.Новгород; 1998; с. 34.
8. Лапшин Р.Д., Мухина И.В., Яковлева Е.И., Смирнова М.Л. Влияние озонированного физиологического раствора на ультраструктуру неокортекса в постперфузионном периоде. Морфология; 1999; 2—3: 89—90.
9. Лебкова Н.П. Трансформация липидов в гликоген в клетках животных и человека. Арх патол 1982; XLIV (6): 68—76.
10. Авцын А.П., Шахламов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки. М: Медицина; 1979; 318 с.
11. Колесова О.Е., Волховская Н.Б. Коррекция гипоксии при перитоните. В кн.: Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция. Тез. докл. М; 2002; с. 62—63.
12. Шкурупий В.А. Ультраструктура клеток печени при стрессе. Новосибирск: Наука. Сибирск. отд.; 1989; 144 с.